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本Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

• 本Hoechst 33258染色液的浓度经过优化，确保可以满足各种常规染色的需要。如需使用特定浓度的Hoechst 33258，请选购Hoechst 33258荧光染料。如需染色活细胞或培养的组织，请选购100×Hoechst33342活细胞染色液，效果更佳。
  
• 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。
  
• 为减缓荧光淬灭，推荐使用抗荧光淬灭封片液。
  
• Hoechst 33258对人体有害，请注意适当防护。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 对于固定的细胞或组织：
  
  • 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。
    
  • 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3～5分钟。
    
  • 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2～3次，每次3～5分钟。
    
  • 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
• 对于活细胞或培养的组织：
  
  • 加入适当量Hoechst 33258染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100μL染色液。
    
  • 在适宜于细胞培养的温度培养20～30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2～3次即可进行荧光检测。细胞发生凋亡时，在荧光显微镜下观察会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。